Дифференцированные изменения показателей клеточного иммунитета у реконвалесцентов COVID-19 в зависимости от тяжести перенесенного заболевания.

Автор: Агафонова Елена Валентиновна^1,3

Соавторы: Решетникова Ирина Дмитриевна^1,2, Скибо Юлия Валерьевна²

¹ФБУН «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора,

²ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет,

³ФГБОУ ВО «Казанский государственный медицинский университет»

Россия, Казань

Формирование дисфункций клеточного иммунитета на сегодняшний день является доказанным последствием перенесенной инфекции COVID-19 [1]. Вирусиндуцируемое нарушение регуляции иммунного ответа провоцирует значительные фенотипические изменения в лимфоцитах (л) периферической крови. Во все большем числе исследований сообщается о снижении количества и нарушениях функций CD4⁺, CD8⁺T л, NК и NКТ у пациентов с COVID-19, особенно выраженные при тяжелом течении заболевания [2]. В единичных исследованиях показано, что количество л после элиминации вируса, постепенно увеличивается до нормального диапазона, при этом активация, дифференцировка и функции л и моноцитов (м) у лиц, которые клинически выздоровели от COVID-19, остаются малоизученными. Цель исследования- оценить показатели клеточного иммунитета у реконвалесцентов COVID 19 с учетом количественного содержания основных и малых субпопуляций л и м, экспрессии дифференцировочных антигенов и активационных маркеров в зависимости от тяжести перенесенного заболевания.

Иммунофенотипирование л и м периферической крови у реконвалесцентов COVID-19 (n= 34) проводили спустя 3-3,5 мес. (Me=97 дней) после перенесенной инфекции. Исследования проводились на проточном цитометре FACSCalibur (Becton Dickinson США) с использованием программы MultiSET. Применялись усовершенствованные способы анализа, позволяющие выделять как основные-СD3+СD19-(Т-л), СD3+CD4+(Т-х), CD3+CD8+(СTL), CD3-CD19+(В-л), СD3-CD16/56+(NК), так и минорные субпопуляции л-CD3+CD16/56+(Т-NК), СD4+CD25+Нi (Т-рег.), CD5+CD19-(B 2), CD5+CD19+ (B 1), СD3-CD8+, CD3-CD4-CD8- (двойные негативные-DN), CD4+CD8+(двойные позитивные-DP), CD4+СD62L+, CD4+CD62L-, CD14++CD16+(провоспалительные/супрессорные m), CD14+16-(классические m); экспрессию маркеров активации на Т-лимфоцитах-CD3+HLADR+(активированные Т-л), CD8+HLADR+(активированные СTL-л) CD14+HLADR+. Анализ проводился в 4 группах: реконвалесценты COVID 19 (гр 1, n = 27), реконвалесценты легкого (гр 2; n = 10,) среднетяжелого (гр. 3; n 9) и тяжелого течения COVID 19         (Гр. 4; n = 8). Контрольную группу составили лица без текущей или перенесенной инфекции SARS-CoV-2 (n=16). Также, при анализе результатов, мы опирались на результаты исследований (референсные значения), приведенные в работах Хайдукова С.В., Зурочки А. В. (2009-2016 г.г.) и других авторов [3]. 

У реконвалесцентов COVID 19 в гр.1 достоверные различия с группой контроля получены для основных (Т-х,СTL, В, NК) и малых субпопуляций л (Т-NК,Т-рег., B2, B1, СD3-CD8+, DP, DN, CD4+СD62L+, CD4+CD62L-). Относительное содержание Т л, Тх, CTL в группе 2 не отличалось от референсных значений (73,3; 46,4; 27,8%%) и группы контроля (p > 0,05). Регистрировалось снижение абсолютных значений Т-х (0,73х10⁹/л), относительных и абсолютных значений В л (9,0 %; 0,16 х10⁹/л) по сравнению с группой контроля (13,2%; 0,29х10⁹/л). На фоне снижения В-л регистрировалось перераспределение субпопуляций В1/В2 в сторону повышения субпопуляции В2 (CD19+CD5+), которая, по литературным данным, является важнейшим продуцентом аутоантител. Уже у реконвалесцентов легкого COVID 19 регистрировалась повышенная экспрессия маркеров активации-ранней CD4+25+ (13,5%; p < 0,05) и поздней -CD3+HLADR (16,78%; p < 0,05); CD8+HLADR+(23,2%; p < 0,05). Регистрировалось нарастание субпопуляций с регуляторой активностью Т-NК (12,9%, p < 0,05), DN (10,8%; p < 0,05), DP(5,8; p < 0,05).  Установлено, что субпопуляции Т-NК, СD4+CD25+Нi являются важнейшими регуляторами иммунного ответа. Т-NК активируют созревание м и продуцируют цитокины, модулирующие активность СD4+л. У реконвалесцентовCOVID 19 средней тяжести и тяжелого течения относительное количество Тл (73,2;73,0 %%), Тх (41,4; 44,0 %%); СTL (25,2 ;26,3 %%) не отличалось от группы контроля и соответствовало референсным показателям. Соотношение CD4+/СD8+ составило l,65;1,69 соответственно (в группе контроля 1,69). Абсолютные значения л СD4+ были ниже, чем в группе контроля (0,69х10⁹/л, 0,60х10⁹/л; p<0,05), хотя и укладывались в референсные интервалы. Также, в группах 3 и 4 абсолютные значения NК были достоверно ниже, чем в группе контроля (0,2х10⁹/л,0,2х ⁹/л; p<0,05). В группах 3 и 4 отмечалось нарастание субпопуляции CD4+25+Hi (5,5;7,5 %%; p<0,05  по сравнению с контролем). Данная популяция продуцируется тимусом как функционально зрелая и осуществляет супрессорную функцию при выраженной антигенной стимуляции [4]. Регистрировался более высокий уровень активированных л CD3+HLADR+ (25,6, 28,9; p<0,05  по сравнению с контролем), CD3+СTL(10,8, 11,9; p<0,05 по сравнению с контролем), CD 4+СD25+(9,8, 11,3; p<0,05). Таким образом, регистрируются долгосрочные изменения иммунофенотипа  и моноцитов периферической крови у реконвалесцентов COVID19, имеющие дифференцированные особенности  в зависимости  от тяжести перенесенного заболевания. В широком масштабе данные нарушения могут иметь решающее значение для изменения контроля внутриклеточных патогенных инфекций, опухолей, и аутоиммунных процессов. 

Работа выполнена за счет средств субсидии, выделенной в рамках государственной поддержки Казанского (Приволжского) федерального университета в целях повышения его конкурентоспособности среди ведущих мировых научно-образовательных центров.

Список использованной литературы.

1. Qin C., Zhou L., Hu Z., et al. (2020) Dysregulation of immune response in patients with coronavirus  2019 (COVID-19) in Wuhan, China. Clin. Infect. Dis 71: 762–768. 

2. Grifoni A., Weiskopf D., Ramirez S.I., et al.. (2021) Targets of T cell responses to SARS-CoV-2 coronavirus in humans with COVID-19 disease and unexposed individuals. Cell  181: 1489–1501.

2. Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Тотолян Арег А., Черешнев В.А. (2009). Основные и малые субпопуляции лимфоцитов периферической крови человека и их нормативные значения. Медицинская Иммунология , , 11, № 2-3, стр. 227-238 

4. Bettini M, Vignali D AA. (2019) Regulatory T cells and inhibitory cytokines in autoimmunity. Curr. Opin. Immunol 6: 612–618