Характеристика микровезикулярных структур в периферической крови доноров.

Автор: Наталья Васильевна Исаева, к.б.н.

Соавторы: Назарова Елена Львовна, к.м.н., Шерстнев Филипп Сергеевич, к.м.н.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства».

Россия, Киров.

В настоящее время накоплен достаточный материал, свидетельствующий об участии внеклеточных микровезикул (МВ) в иммунных реакциях [1,2,3]. При исследовании МВ, происходящих из плазматических мембран и превышающих по диаметру 100 нм, применим метод высокочувствительной проточной цитометрии. Цель работы – охарактеризовать МВ по размерам и источникам их происхождения у здоровых лиц – доноров крови.

Из образцов крови 33 доноров методом центрифугирования (20 минут при 1500 g и комнатной температуре) получали обедненную клеточными элементами плазму; для получения препарата МВ эту плазму центрифугировали (7 минут при 18000 g и охлаждении до минус 4^oC), супернатант заменяли равным объемом фильтрованного фосфатно-солевого буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин (0,5%) и выполняли ресуспендирование осадка. В препарате МВ при помощи набора Megamix-Plus SSC (Biocytex, Франция), включающего гранулы с известным диаметром (160 нм, 200 нм, 240 нм, 500 нм), оценивали размер MB. Происхождение МВ определяли на основании экспрессии маркеров, характерных для тромбоцитов, лейкоцитов, эритроцитов и эндотелиоцитов сосудов (CD41, CD45, CD235a и CD105 соответственно) [4].

В плазме крови доноров 55,9 % всех МВ имели диаметр 160 нм, MB размерами 200 нм, 240 нм и 500 нм составили 29,2 %, 11,7 % и 3,2 % соответственно. Содержание CD41-позитивных (тромбоцитарных) МВ возрастало прямо пропорционально их диаметру с 1,1 % [0,60; 3,05] среди везикул диаметром 160 нм до 12,55 % [3,04; 32,15] среди частиц размером 500 нм (p < 0,001). Аналогичные данные получены при исследовании CD235а-позитивных (эритроцитарных) МВ: их уровень увеличивался с 0,4 % среди частиц размерами 160 и 200 нм ([0,15; 0,90] и [0,20; 2,40]) до 5,20 % [2,00; 20,00] среди везикул диаметром 500 нм (p < 0,01). Установлено, что содержание CD45- (лейкоцитарных) и CD105a-позитивных (эндотелиальных) МВ является минимальным, при этом в МВ разных размеров по содержанию CD45- и CD105a-позитивных частиц не различались.

В результаты работы получены размерные характеристики МВ в плазме крови доноров и дана развернутая картина их происхождения. Преобладание в плазме доноров МВ, источником которых являются тромбоциты и эритроциты, подтверждено данными других исследователей [5]. Характеристики МВ, полученные при обследовании здоровых лиц, могут быть применены в дальнейшем при изучении роли МВ в патогенезе тяжелого интоксикационного синдрома и лимфопролиферативных заболеваний.

Список использованной литературы.

1. Маркова, К.Л. Микровезикулы естественных киллеров регулируют образование сосудов / К.Л. Маркова, А.Р. Козырева, Д.И. Соколов и др. [Текст] // Клеточные технологии в биологии и медицине. – 2020. – № 3. – С. 164-169.

2. Новикова, М.А. Внеклеточные везикулы: биологические свойства и их терапевтический потенциал (обзор современных сведений) / М.А. Новикова М.А., Ю.В. Савич, Е.А. Ласюков, Р.Л. Фролова [Текст] // Лабораторная диагностика. Восточная Европа. – 2021. – 10 (4). – С. 412-419.

3. Noulsri, E. Effects of cell-derived microparticles on immune cells and potential implications in clinical medicine [Text] / E. Noulsri // Lab. Med. – 2021. – Vol. 52(2). – P. 122-135.

4. Robert, S. High-sensitivity flow cytometry provides access to standardized measurement of small-size microparticles – brief report / S. Robert, R. Lacroix, P. Poncelet et al. [Text] // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. – 2012. – Vol. 32. – P. 1054-1058.

5. Вельмискина, А.А. Методология исследования единичных внеклеточных везикул различного клеточного происхождения / А.А. Вельмискина, О.В. Калинина, Т.А. Петрова и др. [Текст] // Российский журнал персонализированной медицины. – 2022. – 3 (2). – С. 101-110.