Изучение уровня Bet v 1- специфической CD4⁺ и СD8⁺ Т-клеточной пролиферации при блокировке рецепторов HLA I и HLA II у пациентов с аллергией на пыльцу березы.

Автор: Порошина Алина Сергеевна

Соавторы: Никонова Aлександра Александровна^1,2, Смольников Eвгений Валентинович^1,2, Литовкина Aлла Олеговна^1,2, Хуэй Ю-Янг³, Вртала Сюзанна³, Феденко Eлена Сергеевна¹, Елисютина Oльга Гурьевна^1,2, Хаитов Mуса Рахимович^1,2,4, Валента Рудольф^1,3,5

¹Федеральное государственное бюджетное учреждение “Государственный научный центр “Институт иммунологии” Федерального медико-биологического агентства, 

²Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования “Российский университет дружбы народов”,

³Центр патофизиологии, инфекций и иммунологии, Венский медицинский университет, Вена, Австрия,

⁴Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования “Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова” Министерства здравоохранения Российской Федерации,

⁵ФГАОУ Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации

Россия, Москва

Аллергические заболевания характеризуются выработкой специфических IgE-антител в ответ на аллергены окружающей среды. До 40% населения страдает от аллергических заболеваний, таких как: аллергический ринит, конъюнктивит, бронхиальная астма, аллергодерматозы и пищевая аллергия. Аллергией на пыльцу березы страдает более 100 миллионов человек во всем мире. Это заболевание является одной из важных проблем здравоохранения в странах Северного полушария, Центральной Европы и центральных частей Азии. Мажорным аллергеном в пыльце березы является Bet v1. Он является членом семейства белков PR-10 с молекулярной массой 17kD. Ведущая роль в презентации данного антигена принадлежит Т-клеткам. CD4⁺ и CD8⁺ лимфоциты распознают аллерген, при его взаимодействии с Т-клеточным рецептором. Презентация Bet v 1 происходит путем его распознавания рецепторами HLA. Цель нашей работы заключалась в оценке CD4⁺ и CD8⁺ Т-клеточной пролиферации при стимуляции Bet v1 c предварительной блокировкой HLA I и HLAII у пациентов с аллергией на пыльцу березы.

Для исследования была сформирована группа пациентов (N=9) с аллергией на пыльцу березы. После подписания информированного согласия, у пациентов отбирали образцы крови. Мононуклеарные клетки (МК) выделяли из цельной крови доноров центрифугированием в одноступенчатом градиенте фиколла. Выделенные клетки обрабатывали Bet v1 в концентрации 12 nM и моноклональными антителами, блокирующими HLA I или HLA II и культивировали в течение 7 дней при 37°С и 5% CO₂ в присутствии флуоресцентного красителя CFSE. Уровень пролиферации CD4⁺ и CD8⁺ Т-клеток оценивали методом проточной цитометрии. Статистическая обработка результатов проводилась с помощью критерия Краскела-Уоллиса с последующим множественным сравнением по Данну.

Результаты исследования показали, что при блокировке HLA I, процентное содержания пролиферирующих CD4⁺ Т лимфоцитов было равно 0.49, а при блокировке HLA II- усредненное значение равно 0.68, а для МК, с добавлением Bet v 1 без блокирующих антител процент пролиферирующих лимфоцитов оказался равен 4.08. Были обнаружены статистические различия между группой с незаблокированными HLA-рецепторами и группой с заблокированными HLA I (p = 0.0268) и статистические различия между группой с незаблокированными HLA-рецепторами и группой с заблокированными HLA II (p = 0.0060), статистическая разница между группой с заблокированным HLA I и с заблокированным HLA IIне обнаружена.

Для CD8⁺Т-клеток мы получили следующие данные: процент пролиферации при стимуляции Bet v1 для группы с заблокированными HLA I оказался равен 0.12, а в группе с заблокированными HLA II- 0.18, в группе без добавления блокирующих антител процент пролиферации составил 1.3%. Статистическая разница между группами для пролиферирующих CD8⁺Т-клеток не обнаружена.

Исследование показало, что распознавание мажорного аллергена пыльцы березы Bet v1 осуществляется в основном CD4⁺ Т-клетками. При этом в распознавании участвуют в равной степени и HLA I и HLA II рецепторы на поверхности Т-лимфоцитов.