Особенности фенотипа у врожденных лимфоидных клеток (ILC) при РА.

Автор: Боева Ольга Сергеевна¹

Соавторы: Беришвили Мария Теймуразовна^1,3, Сизиков Алексей Эдуардович¹, к.м.н., Пашкина Екатерина Александровна^1,3, к.б.н., Козлов Владимир Александрович^1,2, д.м.н.

¹ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии»,

²ФГАOУ ВО «Новосибирский национальный исследовательский государственный университет», 

³ФГАOУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет».

Россия, Новосибирск

Врожденные лимфоидные клетки (ILC) представляют собой гетерогенную группу клеток, которые находятся преимущественно в тканях, а также присутствуют в периферической крови в небольшом количестве. ILC имеют различные функциональные особенности и регулируют направленность иммунного ответа с помощью продукции цитокинов. ILC играют роль во многих заболеваниях, в особенности при ревматоидном артрите (РА). Изучение данной популяции при РА позволит дополнить знание о патогенезе РА, а также в перспективе разработать новые терапевтические подходы, которые смогут влиять на иммунологический баланс и снижать воспалительные процессы при РА. 

В исследование были включены 12 пациентов с РА и 8 условно-здоровых доноров. После подписания информированного согласия у доноров и пациентов собирали 9 мл крови. Из гепаринизированной венозной крови выделяли мононуклеарные клетки периферической крови (МНК ПК) в градиенте плотности фиколл-урографина (1,077 г/мл). Выделенные МНК ПК окрашивали моноклональными антителами, конъюгированными с флюорохромами: анти-Lineage (CD3/14/16/19/20/56) и анти-FceR1 alpha- FITC, анти-CD294- APC/Cy7, анти-CD127-PerCP/Cy5.5, анти-CD336-PE, анти-CD117-APC, PE/Cy7 CD 279- PD 1. ILC определялись как Lin^–CD127⁺, в общей популяции оценивали количество CD294⁺ILC (ILC2), CD117^–CD294^– ILC определялись нами как ILC1, а CD117⁺СD294^– ILC были идентифицированы как ILC3. Фенотип клеток анализировали на проточном цитофлуориметре FACS Canto II (BD Biosciences, США). Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью пакета прикладных программ GraphPad Prism 9.0.0 c использованием критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимости р <0,05.

На первом этапе нами было определено относительное количество различных популяций ILC (ILC1, ILC2 и ILC3) среди МНК ПК. Было показано, что у пациентов с РА статистически значимо снижено число ILC2 клеток по сравнению со здоровыми донорами, в то время как в процентном соотношении ILC1 и ILC3 не наблюдалось достоверных различий между донорами и пациентами. На втором этапе мы обнаружили, что экспрессия молекул PD 1 снижена на всех субпопуляциях ILC у пациентов с РА по сравнению с условно-здоровыми донорами. Однако, при этом на ILC 1 и 3 уровень PD 1 снижался практически до нулевых значений, тогда как ILC 2 экспрессирующих PD 1 сохранялся приблизительно на уровне 7 процентов. Согласно литературным данным, PD 1 на ILC способствует подавлению активации данных клеток, следовательно, полученные нами данные могут свидетельствовать об усилении супрессии ILC2, что в свою очередь может приводить к смещению баланса в сторону Th 1 и Th 17.

Таким образом, ILC являются популяцией клеток, которые вносят весомый вклад в патогенез РА, роль ILC2 предположительно является протективной при РА. Нарушение баланса ILC может способствовать развитию РА, для лучшего понимания патогенеза РА необходимо дальнейшее изучение субпопуляционного состава, фенотипических и функциональных характеристик ILC при данном заболевании. 

При поддержке: Исследование выполнено в рамках темы НИР №122012000366-9 «Изучение иммунопатогенеза фенотипов социально значимых заболеваний человека и полиморбидности как основа для разработки новых методов персонифицированной диагностики и лечения»