Перепрограммирование в эксперименте in vitro трансформированного фенотипа субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов женщин с хронической рецидивирующей инфекционно-воспалительной патологией генитального тракта.

Автор: Пиктурно Светлана Николаевна¹

Соавторы: Нестерова Ирина Вадимовна^1,2, Ковалева Светлана Валентиновна¹,доцент, Чудилова Галина Анатольевна¹, д.б.н., Крутова Виктория Александровна¹, д.м.н.

¹Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации,

²Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования “Российский университет дружбы народов”

Россия, Краснодар

Хронические воспалительные заболевания генитального тракта (ХВЗГТ) занимают лидирующие положение в структуре гинекологической заболеваемости, являясь наиболее частой причиной нарушения репродуктивного здоровья женщин и создавая тем самым сложные медицинские, социально-экономические проблемы. Принципиальное значение в патогенезе ХВЗГТ отводится иммунной системе (ИС), от адекватного или дефектного функционирования которой зависят особенности течения и исход заболевания [1]. Тенденция увеличения частоты рецидивирования ХВЗГТ указывает на необходимость изучения эффекторных и регуляторных механизмов иммунной системы. Особенно актуальным является изучение трансформации рецепторного аппарата нейтрофильных гранулоцитов (НГ), как основных клеток противомикробной защиты, с дальнейшим обоснованием возможности их перепрограмирования под действием иммунотропных субстанций при рецидивирующих ХВЗГТ у женщин [2].

Цель исследования: оценить эффект влияние иммунотрпоного гексапептида (ГП) – аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинина в системе in vitro на негативно трансформированный фенотип субпопуляций НГ CD11b⁺CD64^–CD32⁺CD16⁺ и CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺ у иммунокомпрометированных женщин в период обострения рецидивирующих ХВЗГТ. 

Проведено тестирование НГ периферической крови (ПК) 20 условно-здоровых женщин от 20-40 лет (группа сравнения), 20 женщин 20-40 лет в период обострения ХВЗГТ (группа 1) соответствующего возраста. Влияние ГП на НГ ПК 20 женщин с ХВЗГТ оценивали в системе invitro (группа 2). Методом проточной цитометрии (CYTOMICS FC500, США) определяли количество НГ и уровень плотности мембранных экспрессии рецепторов субпопуляцийCD11b⁺CD64^–CD32⁺CD16⁺НГ и CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺ НГ. Для статистической обработка полученных данных использовались пакеты программ Microsoft Exсel 2016, StatPlus 2010 и непараметрические тесты – критерии Вилкоксона и Манна-Уитни. Результаты выражали в виде медианы (верхний и нижний квартиль) – Me (Q1; Q3). Статистически значимыми различия принимали при p < 0,05.

В образцах ПК условно-здоровых женщин в 94,9(93,98;97,40) %, представлена мажорная субпопуляция CD11b⁺CD64^–CD32⁺CD16⁺НГ , минорная  субпопуляция CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺НГ- в 1,24(0,29; 5,41)% .При этом в мажорной субпопуляции отмечалась высокая плотность экспрессии CD16 и низкий уровень экспрессии CD11b, CD32,а в минорной субпопуляции -высокая плотность экспрессии СD 64, СD16, CD11b, CD32.

У женщин в период обострения ХВЗГТ (группа 1) содержание субпопуляции CD11b⁺CD64^–CD32⁺CD16⁺НГ составило 93,98(89,84; 95,71)%, что не отличалось от группы сравнения. В тоже время выявлена тенденция к снижению плотности экспрессии CD16 в 1,3 раза до 90,50(79,37; 125,50) против 118,00(108,00; 146,25) в группе сравнения (p > 0,05) на фоне неменяющегося уровня плотности рецепторов CD11b, CD32. Количество субпопуляции CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺НГ было в пределах значений условно-здоровых женщин, и отсутствие увеличения данной субпопуляции свидетельствует о более благоприятном течении обострения воспалительного процесса бактериальной этиологии. Тем не менее, происходит более значимое переоснащение субпопуляции CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺НГ вследствие увеличения в 3 раза уровня экспрессии CD64 – 7,34(6,88; 15,35) против 2,40(2,07; 5,06) в группе сравнения (р < 0,05), в 1,9 раз CD32 – 11,10(7,27; 18,55) против 5,84(4,24; 9,34) в группе сравнения (р > 0,05) и снижения в 1,6 раз плотности экспрессии по MFI CD16 – 94,8(55,20;126,00) против 149,00(128,00;157,00) в группе сравнения (р<0,05). Полученные данные позволяют говорить о негативно трансформированном фенотипе минорной субпопуляций НГ, что, по-видимому, препятствует выполнению НГ эффекторных функций.

В эксперименте in vitro в группе 2 под влиянием ГП количесвто мажорной и минорной субпопуляции НГ не изменялся. Однако установлен модулирующий характер фенотипческих изменений субпопуляций CD11b⁺CD64^–CD32⁺CD16⁺НГ и CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺НГ. Так, в мажорной-«сторожевой» субпопуляции НГ отмечено изменение плотности экспрессии CD16, уровень которой восстановился до значений группы сравнения (p>0,05). В минорной субпопуляции CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺НГ под влянием ГП произошла нормализация плотности экспрессии по MFI CD16 и снижение плотности экспрессии по MFI CD64 до уровня группы сравнения (p_1-2 > 0,05). Уровни плотности рецептора CD32 и CD11b существенно не менялись.

В результате проведенных исследований у женщин с рецидивирующими ХВЗГТ в период обострения установлена негативная трансформация фенотипа мажорной субпопуляции CD11b⁺CD64^–CD32⁺CD16⁺ НГ и минорной субпопуляции CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺НГ со снижением плотности экспрессии CD16 в обеих субпопуляциях и повышенной плотностью экспрессии CD64 и CD16 в минорной субпопуляции НГ, что свидетельствует о дисфункции НГ и может быть причиной поддержания хронического воспалительного процесса и недостаточной эффективности этиопатогенетической терапии. 

Таким образом, продемонстрированы позитивные эффекты вляний ГП в системе in vitro. Показано перепрограмиирование негативно трансформированного фенотипа субпопуляций мажорной и минорной субпопуляции женщин с ХВЗГТ. Модулирующее влияние ГП выражалось позитивным эффектом влияний на плотность экспрессии CD16 как в мажорной, так и в минорной субпопуляциях НГ. Тогда как, в субпопуляции CD11b⁺CD64⁺CD32⁺CD16⁺НГ уровень экспрессии CD64, известного маркера остроты и тяжести бактериального процесса [3], изначально повышенный в Группе1, на воздействия ГП в системе in vitro в Группе 2 снижался. Полученные данные свидетельствуют о способности ГП перепрограммировать трансформированный фенотип мажорной и минорной субпопуляции , что отражает его позитивны иммуномодулирующий эффект и , кроме того , позволяют предположить возможность использования фармпрепаратов ,созданных на основе субстанции ГП , для создания новых патогенетически обоснованных иммунотерпевтических подходов к лечению рецидивирующих ХВЗГТ у женщин.

Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и администрации Краснодарского края в рамках научного проекта № 19-415-230001 р а.

Список использованной литературы.

1. Обухова О.О., Трунов А.Н., Горбенко О.М., Шваюк А.П. Цитокины и местное хроническое воспаление в формировании бесплодия у женщин фертильного возраста // Сибирский научный медицинский журнал. – 2019. – Т. 39 , №6. –С. 77–83. DOI: 10.15372/SSMJ20190610

2. Нестерова И. В. Таргетная иммунотерапия при вторичных иммунодефицитах с инфекционным синдромом // Российский иммунологический журнал. – 2019. – Т. 13, № 4(22). – С. 1512-1516. DOI: 10.31857/S102872210007074-6

3. Hong C.W. Current understanding in neutrophil differentiation and heterogeneity.Immune Netw, 2017,Vol. 17, no 5, pp. 298– 306. DOI: 10.4110/in.2017.17.5.298