Полифенольные производные амфипатических пептидов как перспективные антиоксиданты. Получение и физико-химическая характеризация.

Автор: Копотев Алексей Евгеньевич³

Соавторы: ¹Шатилов Артём Андреевич, ¹Шатилова Анастасия Витальевна,¹Сапрыгина Лариса Викторовна, ¹Бабихина Марина Олеговна, ^1,2Турецкий Евгений Александрович, ¹Андреев Сергей Михайлович, к.х.н., ¹Смирнов Валерий Валерьевич, д.фарм.н., доцент, ¹Хаитов Муса Рахимович, д.м.н., профессор

¹Федеральное государственное бюджетное учреждение “Государственный научный центр “Институт иммунологии” Федерального медико-биологического агентства, 

²Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации, 

³ФГБОУ «МИРЭА — Российский технологический университет»

Россия, Москва

Окислительный стресс является одной из основных причин гибели клеток при инфекционных заболеваниях, и одним из перспективных подходов к его ингибированию является применение природных антиоксидантов – кверцетина и галловой кислоты. Недостатком данных соединений является их относительно низкая биодоступность, и целью данной работы являлось получение и характеризация конъюгатов природных полифенолов с амфифильными пептидами.

Пептиды KKYY, KLYY, KKIRARLKYAC, (KKIRARLK)₂KYAC, (((R)₂K)₂K)₂KACAC были получены твердофазным синтезом, карбоксильные производные кверцетина были получены по реакции Манниха, присоединение оснований Манниха и галловой кислоты к пептидам производилось методом активированных эфиров. Продукты выделялись методами ВЭЖХ и гель-фильтрации, охарактеризовывались методами ТСХ, ВЭЖХ, ГХ, МС, КЭ. 

Для анализа полученных пептидов и производных наибольшую эффективность показало сочетание методов КЭ и МАЛДИ-ВП-МС. В ходе получения высокореактивных производных кверцетина были установлены оптимальные условия получения высокореактивного основания Манниха на основе кверцетина – 6-N-кверцетилметил-аминогексановой кислоты; реакция количественно проходит в течение двух часов в среде этанола при 60 С и четырёхкратном избытке аминокапроновой кислоты, её ход может определён по MRM-переходу 446 -> 132,8. Среди полученных активированных эфиров галловой кислоты наибольшей активностью обладал O-галлат оксима этилацетата, использовавшийся в 16-ти кратном избытке для N-концевой модификации пептидов при их синтезе на смоле; ход реакции определялся по пику (m/z пептида) +152n, где n – число остатков галловой кислоты. Для пост-синтетической модификации пептидов умеренной активностью обладал N-гидроксисукцинимид галловой кислоты, получаемый в избытке дициклогексилкарбодиимида; ход реакции его получения определялся методом ГХ/МС по молекулярному иону три-О-ТМС-суррогата с m/z 483,2 (максимальная интенсивность при ЭИ – фрагмент с m/z 369,2); этим же методом в смеси могут быть определены все реагенты.

Полученные полифенольные пептиды в настоящее время проходят комплексные цитологические исследования антиоксидантной активности. Предлагаемая нами методология апробирована для кверцетина и галловой кислоты, однако, мы считаем, что она также имеет высокий потенциал для дальнейшей экстраполяции на иные природные полифенолы.