Разработка суррогатного вирус-нейтрализующего теста, адаптированного к детекции антител против мутантных штаммов SARS-CoV-2

S-белок, входящий в состав оболочки коронавируса, считается наиболее привлекательной мишенью для создания вакцины против SARS-CoV-2 и диагностических разработок. Скрининг сывороток вакцинированных или переболевших доноров с помощью теста на нейтрализацию вируса (VNT) является надежным подходом для проведения сероэпидемиологических исследований. Наиболее распространенными являются тесты нейтрализации с использованием нативного или псевдотипированного вируса.

Проведение этих тестов требует обеспечения уровня высокой биологической безопасности, следовательно, они непригодны для массового применения. Недавно был разработан «суррогатный» VNT (sVNT). Данный анализ основан на конкурентном ингибировании взаимодействия рецептора ACE-2 с меченным пероксидазой хрена (HRP) рецептор-связывающим доменом Spike-белка SARS-CoV-2. Появление мутаций в S-белке коронавируса приводит к увеличению разнообразия штаммов SARS-CoV-2, что делает необходимым разработку новых тестовых систем.

Нами была оптимизирована суррогатная вирус-нейтралиция, позволяющая в кратчайшие сроки переориентировать тест-систему под новые штаммы вируса. Клетки HEK293 трансфецировали плазмидой, содержащей S-белок. После появления S-белка на поверхности клеток к ним добавляли тестируемые сыворотки и инкубировали в течение 30 минут. Далее к клеткам добавляли конъюгат ACE2-A488 и детектировали связывание с помощью проточной цитофлуориметрии.